期刊简介
1980年创刊，中华医学会主办。本刊是中国小儿外科专业的高水平学术期刊。充分报道中国小儿外科学科领域基础及临床研究的先进理论、新兴技术和前沿成果，使理论和实践相结合，以促进中国小儿外科学科的发展。本刊读者主要为从事小儿外科临床、教学、科研的工作者及外科、儿科、产科有关人员。本刊辟有述评、临床研究、实验研究、综述、会议纪要、研究报告、技术革新、病例报告等栏目。
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首页>中华小儿外科杂志
- 杂志名称：中华小儿外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：0253-3006
- 国内刊号：42-1158/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全国中文核心期刊期刊收录：JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 国家图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 上海图书馆馆藏, 知网收录(中)
慢病毒介导的shRNA靶向干扰β-catenin神经母细胞瘤稳定细胞株的建立
姚伟；李凯；徐挺；肖现民；王作鹏
关键词：神经母细胞瘤, RNA干扰, 慢病毒属
摘要：目的 建立稳定抑制β-eatenin基因表达的入神经母细胞瘤BE2C细胞株,为探讨Wnt/-eatenin信号在神经母细胞瘤发生中的作用提供细胞模型.方法 使用Real-time PCR、Westernblot的方法检测BE2C细胞中β-catenin在基因及蛋白水平的表达.于β-catenin基因编码区选择4个siRNA靶点及1个非编码序列(NC)合成5对shRNA干扰序列,分别与质粒PgLV-H1-GFP+ Puro载体连接,构建重组质粒；将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染BE2C细胞,筛选出干扰效果佳的shRNA序列,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株.RT-PCR、Western blot检测干扰组β-catenin抑制效率.结果 RT-PCR、Western blot检测显示BE2C细胞中β-catenin在基因及蛋白水平均有较好的表达；慢病毒的滴度达到1×108 TU/ml时,侵染BE2C细胞的效率可达到90％左右；通过RT-PCR和Western blot检测结果显示G1为有效的干扰靶点；通过嘌呤霉素筛选得到稳定靶向干扰β-catenin细胞株,抑制效率可达约90％.结论 成功构建了β-catenin shRNA慢病毒表达载体,建立了稳定抑制β-eatenin基因表达的人神经母细胞瘤BE2C细胞株,为进一步研究β-catenin在神经母细胞瘤发生中的作用提供了可靠的细胞模型.
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